文献类型：期刊文献

中文题名：红楠ISSR-PCR反应体系的建立和优化

英文题名：Establishment and Optimization of ISSR-PCR Reaction System of Machilus thunbergii

作者：姜荣波[1] 姜景民[1] 刘军[1] 陈益泰[1] 栾启福[1] 岳华峰[2]

第一作者：姜荣波

机构：[1]中国林业科学研究院亚热带林业研究所;[2]国家林业局泡桐研究开发中心

年份：2011

卷号：24

期号：2

起止页码：194-199

中文期刊名：林业科学研究

外文期刊名：Forest Research

收录：CSTPCD;;Scopus;北大核心:【北大核心2008】；CSCD:【CSCD2011_2012】；

基金：中国林业科学研究院所基金"亚热带珍贵阔叶用材树种收集;评价和选育技术研究"(RISF6808);浙江省科技计划面上项目"樟楠类优质用材树种优良品种选育和无性繁殖技术研究"(2009C32068)

语种：中文

中文关键词：红楠;ISSR-PCR反应体系;单因子试验;正交设计

外文关键词：Machilus thunbergii; ISSR-PCR reaction polymorphism; single factor experiments; orthogonal design

分类号：S718.46

摘要：为建立稳定的红楠ISSR-PCR最佳反应体系,在探索红楠基因组DNA提取的基础上,利用单因子试验和正交试验设计对反应体系进行优化。首先采用单因子试验对Mg2+、引物、模板DNA、dNTPs的不同浓度水平进行优化,找出ISSR-PCR反应各因素的最佳浓度;同时为进一步增加结果的可靠性,采用正交试验设计方法[L9(34)]对Mg2+、引物、模板DNA、dNTPs 4个因素3个浓度水平进行优化和筛选。综合两种试验方法结果,最终获得了红楠ISSR-PCR最佳反应体系:反应体系为20μL,Taq酶0.05 U.μL-1,Mg2+2.0 mmol·L-1,模板DNA 1 ng·L-1,dNTPs 0.3 mmol·L-1,引物(835)0.5μmol·L-1,1×PCR缓冲液。建立重复性好、稳定性优良的ISSR-PCR反应体系,为下一步红楠群体遗传结构和遗传变异研究提供了技术支持。
In order to establish stable ISSR-PCR reaction system of Machilus thunbergii,single factor and orthogonal experiment design were used to optimize the reaction system after exploring M.thunbergii DNA extraction.For finding optimal concentration of factors of ISSR-PCR,the different levels of concentration of Mg2＋,primer,template DNA,dNTPs were trailed by single factor experiment.Meanwhile,in order to improve the reliability of the results of the single-factor test,the authors also adopted orthogonal design [L9（34）] by four factors,three levels for further optimizing and screening the best conditions of Mg2＋,primer,template DNA,and dNTPs.The best ISSR-PCR reaction system of M.thunbergii was eventually established by comparing the two method＇s results,which included 20 μL reaction system,Taq enzyme,0.05 U·μL^-1,Mg^2＋ 2.0 mmol·L^-1 template DNA 1 ng·L^-1,dNTPs 0.3 mmol·L^-1,primers（835） 0.5 μmol·L^-1,and 1×PCR buffer.The establishment of the better repeatability and stability ISSR-PCR reaction system could provide technical support for further research of genetic structure and genetic variety of M.thunbergii group.