文献类型：期刊文献

中文题名：红花石蒜ISSR-PCR反应体系的建立

英文题名：Establishment of ISSR-PCR in Lycoris radiata

作者：杨志玲[1] 冯刚利[1] 谭梓峰[1] 栾启福[1] 王承南[2]

第一作者：杨志玲

机构：[1]中国林业科学研究院亚热带林业研究所;[2]中南林学院资源与环境学院

年份：2006

卷号：19

期号：4

起止页码：509-512

中文期刊名：林业科学研究

外文期刊名：Forest Research

收录：CSTPCD;;Scopus;北大核心:【北大核心2004】；CSCD:【CSCD2011_2012】；

基金：浙江省重点农业项目(2004C22041)部分内容

语种：中文

中文关键词：红花石蒜;叶片;ISSR-PCR

外文关键词：L. radiata; leaves; ISSR-PCR

分类号：S682.29

摘要：以红花石蒜叶片基因组DNA为模板,分析了模板DNA、引物、dNTPs、Mg2+的浓度及Taq DNA聚合酶的用量对ISSR-PCR扩增结果的影响。建立了石蒜ISSR分析最优化的反应体系及应用程序:即25μL反应体系中,有20 ng模板DNA、0.5μmol.L-1随机引物、150μmol.L-1dNTPs、2.0 mmol.L-1Mg2+、1.0 U Taq DNA聚合酶。反应程序为:94℃预变性5 m in;然后45个循环:每个循环94℃变性45 s,55℃退火60 s,72℃延伸2 m in;循环结束后72℃延伸7 m in。
In this paper, the influencing factors of inter-simple sequence repeat （ISSR） were analyzed by using genomic DNA of Lycoris radiata. By adjusting the concentration of template DNA, Mg^2＋, dNTPs and primer, the contents of Taq DNA polymerase and the different temperature, the stable and reproducible optimum reaction system of ISSR-PCR amplification and PCR amplification parameters were established for L. radiata. The optimal system contains 20 ng template DNA, 1.0 U Taq DNA polymerase, 2.0 mmol·L^-1 Mg^2＋, 150 μmol·L^-1 dNTPs and 0.5 mmol·L^-1 primer in 25 μL reaction volume. The amplification program was： after 1 cycle initial denaturation at 94 ℃ for 5 min, each 45 cycles consist of 94 ℃ 45 s, 55 ℃ 50 s, 72 ℃ 2 min, then final extension was at 72 ℃ for 7 min.