文献类型：专利

中文题名：一种楸树木质部原生质体分离和转化的方法

作者：王军辉[1] 樊二勤[1] 王智[1] 麻文俊[1] 卢楠[1] 付鹏跃[1] 曲冠证[1] 刘彩霞[1]

第一作者：王军辉

机构：[1]中国林业科学研究院林业研究所;

专利类型：发明专利

申请号：CN202011015336.7

申请日：20200924

申请人地址：100091 北京市海淀区东小府2号

公开日：20201222

代理人：王加岭;杨静

代理机构：11498 北京智为时代知识产权代理事务所(普通合伙)

语种：中文

中文关键词：原生质体;楸树;木质部;原生质体分离;茎段;酶解;木本植物;转化;分子生物学研究;氯化铯梯度离心;原生质体溶液;原生质体细胞;高效转化;生长健康;水平离心;重要工具;植株;高纯度;酶解液;避光;介导;去皮;质粒;重悬;去除;摇晃;过滤;浸泡;温室;细胞;释放

年份：2020

摘要：本发明提供了一种楸树木质部原生质体分离和转化的方法，其包括如下步骤：S1、选择温室内生长健康的楸树植株，将茎段去皮后，浸泡于酶解液中避光静置；S2、酶解结束后，将茎段转移到MMG溶液中，轻轻摇晃，以释放酶解完的原生质体细胞；随后进行过滤以去除杂质，并通过水平离心进行原生质体收集；最后加入适量MMG重悬细胞，获得原生质体溶液；S3、利用氯化铯梯度离心的方法进行高纯度质粒的提取；S4、利用PEG介导的方式进行原生质体高效转化。本发明提供的方法以楸树木质部为材料进行原生质体分离和转化，分离得到的原生质体具有杂质少，数量多的优点，可获得高质量的楸树原生质体，同时提供了系统高效的转化方法，为木本植物的分子生物学研究提供了重要工具。