文献类型：专利

中文题名：一种体外大量获得白蜡虫dsRNA的体系构建方法

作者：陈航[1] 凌晓霏[1] 陆沁[1] 张金稳[1] 王伟伟[1] 柳鹏飞[1] 汪伟[1] 陈晓鸣[1]

第一作者：陈航

机构：[1]中国林业科学研究院资源昆虫研究所;

专利类型：发明专利

申请号：CN202010427109.9

申请日：20200519

申请人地址：650224 云南省昆明市盘龙区白龙寺

公开日：20200901

代理人：于洪;陈左

代理机构：53100 昆明正原专利商标代理有限公司

语种：中文

中文关键词：大肠杆菌;目标基因;单菌落;双酶切;大肠杆菌感受态细胞;液体摇床培养;重组质粒转化;单细胞克隆;固体培养基;扩增产物;浓缩菌液;体系构建;新陈代谢;有效干扰;载体质粒;幼虫;表达量;反转录;菌液喷;总RNA;虫体;菌液;菌株;种体;繁殖;复制;体内;筛选;基因

分类号：S89

年份：2020

摘要：本发明涉及一种体外大量获得白蜡虫dsRNA的体系构建方法，首先提取白蜡虫总RNA并反转录为cDNA后进行PCR扩增，扩增产物与L4440载体质粒分别双酶切，将双酶切后产物连接，得到的重组质粒转化进入大肠杆菌感受态细胞HT115（DE3）菌株中，涂布固体培养基筛选单菌落，然后将单菌落液体摇床培养至OD₆₀₀=0.38?0.42，加入IPTG诱导后浓缩菌液，用于RNA干扰实验。本发明通过单细胞克隆大肠杆菌含有白蜡虫目标基因，又通过此大肠杆菌自身新陈代谢和大量的自我繁殖复制，获得大量含白蜡虫基因的dsRNA的菌液，将含dsRNA菌液喷施白蜡虫幼虫，从白蜡虫虫体表面进入体内，有效干扰目标基因表达量。