文献类型：专利

中文题名：一种介导双链RNA进入中华紫胶虫体内的方法

作者：陈航[1] 王伟伟[1] 凌晓霏[1] 陆沁[1] 柳鹏飞[1] 张金稳[1]

第一作者：陈航

机构：[1]中国林业科学研究院高原林业研究所;

专利类型：发明专利

申请号：CN201910181801.5

申请日：20190311

申请人地址：650224 云南省昆明市盘龙区白龙寺

公开日：20231003

代理人：于洪;陈左

代理机构：昆明正原专利商标代理有限公司

语种：中文

中文关键词：转染;菌体;体内;基因工程技术;感受态细胞;基因表达量;扩大培养;扩增产物;酶切产物;有效干扰;重组质粒;双链RNA;反转录;双酶切;幼虫期;注射法;总RNA;虫体;胶量;介导;菌液;喂食;稀释;涂抹;昆虫;转入;参考

年份：2023

摘要：本发明涉及一种介导双链RNA进入中华紫胶虫体内的方法，属于基因工程技术领域。该方法首先提取中华紫胶虫总RNA并反转录为cDNA后进行PCR扩增，扩增产物和L4440载体经SacI和SalI双酶切，酶切产物利用T4连接酶连接过夜，得到的FAD?L4440重组质粒转入到HT115感受态细胞中，扩大培养至菌液OD₆₀₀为0.1~0.7，加入IPTG诱导2~5h，得到FAD?L4440?HT115菌体，将菌体稀释后直接涂抹在中华紫胶虫幼虫期虫体上。本发明方法能将dsRNA转染到紫胶虫体内，有效干扰FAD基因表达量，从而引起个体泌胶量降低，为RNAi转染过程中不适用注射法、喂食等转染方法的昆虫提供参考。