文献类型：期刊文献

中文题名：构树ISSR反应体系的优化与建立

英文题名：Establishment and Optimization of ISSR Reaction System of Broussonetia papyriferaz

作者：廖声熙[1] 崔凯[1] 张鹏[1,2] 王海英[1] 崔永忠[1] 袁首乾[1,2]

第一作者：廖声熙

机构：[1]中国林业科学研究院资源昆虫研究所;[2]西南林业大学资源学院

年份：2013

期号：1

起止页码：76-80

中文期刊名：林业科学研究

外文期刊名：Forest Research

收录：CSTPCD;;Scopus;北大核心:【北大核心2011】；CSCD:【CSCD2013_2014】；

基金：国家自然科学基金"西南干热河谷野生构树种质评价与分子鉴定研究(30972383)";中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金(RIRICAF201007M)

语种：中文

中文关键词：构树;ISSR;PCR反应体系;正交试验优化

外文关键词：Broussonetia papyrifera; ISSR; PCR reaction system; optimization by orthogonal tests

分类号：S718.46

摘要：利用正交试验对Taq酶浓度、引物浓度、dNTPs浓度、Mg2+浓度和模板DNA浓度5个因素进行优化,从而建立了一套适宜构树的ISSR-PCR反应体系。在20μL的反应体系中,各反应物的最适宜含量为:0.07 U.μL-1TaqDNA聚合酶、0.35μmol.L-1ISSR引物、0.3 mmol.L-1dNTPs,2.0 mmol.L-1Mg2+、1.2 ng.μL-1模板DNA。PCR扩增程序为:94℃预变性5 min,94℃变性30 s,46℃退火45 s,72℃延伸2 min,40个循环。
The effects of five factors, such as the concentration of Taq DNA polymerase, primers, dNTPs, Mg2~ and DNA template, on ISSR-PCR reaction were optimized by orthogonal tests. Thus a suitable ISSR-PCR reaction system for Broussonetia papyrifera was established. The optimized ISSR-PCR system for B. papyrifera in 20 μL reac- tion mixture contained 0. 07 U·μL^-1 Taq DNA polymerase, 0.35 μmol·L^-1 ISSR primers, 0. 3 mmol·L^-1 dNTPs, 2. 0 mmol·L^-1 Mg^2＋ and 1.2 ng·μL^-1 DNA template. The suitable PCR protocol is preliminary denatur- ation at 94 ℃ for 5 min, 40 cycles of denaturation at 94 ℃ for 30 s, anneal at 46 ℃ for 45 s, extended at 72 ℃ for 2 min. This study could provide some references for the genetic diversity analysis of B. papyrifera.