文献类型：专利

中文题名：一种基于荧光dUTP的自动检测SSR分子标记的方法

作者：甘四明[1] 李发根[1] 翁启杰[1] 李梅[1] 周长品[1] 于晓丽[1]

第一作者：甘四明

机构：[1]中国林业科学研究院热带林业研究所;

专利类型：发明专利

申请号：CN201010239919.8

申请日：20100728

申请人地址：510000 广东省广州市龙洞中国林业科学研究院热带林业研究所

公开日：20130102

代理人：贺红星

代理机构：44288 广州市越秀区哲力专利商标事务所(普通合伙)

语种：中文

中文关键词：引物;基因组DNA;标记检测;分子标记;快速冷却;荧光dUTP;自动检测;降落PCR;超纯水;荧光;冰上;超纯;甲酰;内标;配制

年份：2013

摘要：本发明提供了一种基于荧光dUTP的自动检测SSR分子标记的方法，包括以下步骤：(1)配制PCR反应体系：取1.0μL 10×buffer、dNTP 25～50μM、MgCl₂2.0mM、前向引物0.5μM、后向引物0.5μM、Taq酶1个单位、荧光dUTP10pmol和基因组DNA 5ng混合，加超纯水补至10μL；(2)进行降落PCR：94℃4min；20个循环：94℃30s、70～60℃或者66～56℃30s且每个循环降低0.5℃、72℃1min；再26个循环：94℃30s、60或者56℃30s、72℃1min；最后72℃10min，得PCR产物；(3)取PCR产物1.0μL加入9.34μL超纯甲酰胺、0.16μL分子量内标，95℃5min后放置冰上快速冷却，在测序仪上进行标记检测。